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【原创】关于hla分型的临床应用，让我们看看最新共识怎么说
前言
造血干细胞移植（hsct）技术的应用挽救了无数血液肿瘤患者的生命。近些年随着移植体系及预处理方案的不断完善，越来越多的患者可以成功治愈并且可以回到正常的工作生活中去。造血干细胞移植就是将供者的造血干细胞通过静脉输注到患者体内，这些造血干细胞会进入患者骨髓，并在骨髓中生根发芽再次生产出健康的血细胞，从而彻底治愈疾病的一种方法。在hsct中如何选择最佳的供者一直是当下研究的热点。那么，首当其冲就涉及到人类白细胞抗原（human leukocyte antigens，hla）的分型，作为决定组织相容性的物质基础，它在造血干细胞移植中发挥了重要的作用。精确的hla分型与配型，可以减少患者移植后移植物抗宿主病的发生率，增加移植成功率。本文将结合最新发布的共识介绍hla分型的重要临床应用。
1.hla简介
hla是编码主要组织相容性复合体（mhc）的基因，位于6p21.31的区域，包含了一系列紧密连锁的基因座。hla具有高度的多态性，根据结构和功能等因素hla主要分为经典的hla-i类基因和hla-ii类基因。hla-i型基因主要包括了hla-a, hla-b，hla-c等经典的抗原基因，而hla-ii类基因主要包括包括dr、dq、 dp等基因[1]（如图1）。
图1 扩展mhc区域的基因图谱[2]
2.hla分型的发展历程
hla分型历经多年的发展（如图2）[3]，从过去的血清学及细胞学分型到现在的分子生物学分型，不仅极大的提高了hla分型的准确性，而且也推进了hla分型在血液病患者造血干细胞移植中的应用。
图2 hla分型的发展历程[3]
3.hla的检测方法
目前，hla分型的方法主要包括低分辨水平的序列特异性引物(ssp)法、中分辨水平的序列特异性寡核背酸探针(ssop)法、高分辨水平的基于测序分型（sbt）法以及等位基因水平的二代测序（ngs）法，不同的hla分型技术比较[4]如图3所示。其中，sbt技术依然是hla基因分型的金标准，具有特异性强及准确性高的特点。此外，不可否认的是随着ngs技术的飞速发展，其应用在hla分型方面也有着突出的优势，ngs技术是对hla基因组全长序列进行测序，测序的深度和广度都比较高，并且具有通量大、速度快、可同时检测经典hla-ⅰ类和hla-ⅱ类基因、非经典hla-ⅰ类基因等优势，对于98%以上样本可直接获得唯一、最高等位基因分辨率的分型结果[5]。
图3 不同hla分型方法的比较[4]
4.hla基因分型在临床应用中的推荐意见
hla分型的重要性不言而喻。准确的hla分型在造血干细胞移植（hsct）、实体器官移植（sot）、血小板难治性患者的输血医学以及各种疾病关联和药物基因组学应用的诊断工作中至关重要[4]。今年8月，《人类白细胞抗原基因分型技术平台规范化建设及临床应用专家共识》[5]正式发布，文中明确了hla基因分型在临床应用中的推荐意见，如下文所示：
推荐意见25：对于拟进行初次、二次allo-hsct的患者和潜在供者，推荐采用ngs或 sbt技术，至少检测hla-a、b、c、drb1、dqb1位点 ；增加dpb1、dpa1、dqa1、drb3/4/5位点，及非经典hla位点和mic基因的等位基因型别，可有助于分析和确定allo-hsct供受者基因型相合程度及单体型是否相合。
推荐意见26：在潜在供者选择中，首选hla‑a、b、c、drb1、dqb1、dpb1、dpa1、dqa1、drb3/4/5 及更多hla位点相合的供者；其次选择hla-a、b、c、drb1、dqb1位点相合，其他位点有文献报道为可允许的等位基因错配或抗原错配供者。当存在hla-a、b、c、drb1、dqb1位点错配时，需进行供受者hla可允许或不可允许错配分析，选择等位基因为可允许错配或抗原相合的供者。当有多个潜在供者存在相同 hla等位基因或抗原错配时，可结合年龄、性别、abo血型、hla抗体（包括dsa、ndsa）及kir基因分型等结果综合考虑。
推荐意见27：在进行供受者hla错配分析时，建议基于中国汉族人群hla等位基因cwd、单体型频率和连锁数据库，分析等位基因和位点连锁错配类型，结合错配分值和tce模型、中华骨髓库和国内外各移植中心的经验、患者疾病分类和疾病状态，从而全面系统地分析和判断hla等位基因或抗原错配对于移植风险的影响。
推荐意见28：对于初诊患者hla-ⅰ类/ⅱ类位点或者全部位点均为纯合子，建议送检口腔黏膜细胞等非血液细胞样本进行hla基因分型复核；对于移植后复发患者建议同时送检移植后外周血和口腔黏膜细胞等非血液细胞样本进行hla-loss检测。
推荐意见29：对于移植前预存 hla抗体、移植后有造血重建不良等临床表现的患者，移植后新生dsa、ndsa 或交叉反应组抗体的患者，建议定期动态检测特异性hla抗体，随访hla抗体类型和mfi值的变化，以降低移植后并发症发生的风险。
推荐意见30：推荐采用hla等位基因、hla单体型、hla位点间连锁，进行与疾病或药物选择的相关性分析。不仅有助于临床进行疾病的诊断或鉴别诊断、药物的选择及避免药物不良反应的发生，还可进行hla分子与疾病机制的相关性研究。
5.结语
hla配型的准确与否会直接关系到移植的效果和患者的生存质量。从过去的血清学和细胞学分型到现在的分子分型，从过去的hla 5位点、6位点分型到现在的9位点分型，全面精准的hla分型在移植供者选择中发挥了主要的作用。
荻硕贝肯从设置之初就是围绕人类组织相容性系统研发一系列的原创生物技术，并起步于造血骨髓移植前hla配型业务，曾多次参与中华骨髓库入库分型检测任务，并在该领域多年稳居市场份额第一位。经过十余年的技术累积，已为临床提供超过25,0000份hla高分辨分型检测服务，得到临床患者与医生的广泛认可。与此同时，公司也将立足当下不断拓展技术应用，在hla全长、hla-snp、hla-loss等方向持续探索，今后也将一如既往以高标准高要求为临床医生及患者提供更好的检测服务。
参考文献
[1] khaddour k, hana ck, mewawalla p. hematopoietic stem cell transplantation. 2023 may 6. in: statpearls [internet]. treasure island (fl): statpearls publishing; 2023 jan–.
[2] djaoud z, parham p. hlas, tcrs, and kirs, a triumvirate of human cell-mediated immunity. annu rev biochem. 2020 jun 20;89:717-739. doi: 10.1146/annurev-biochem-011520-102754. pmid: 32569519.
[3] 骨髓移植hla配型/赵桐茂编著.-上海：上海科学技术出版社，2015.7
[4] madden k, chabot-richards d. hla testing in the molecular diagnostic laboratory. virchows arch. 2019 feb;474(2):139-147. doi: 10.1007/s00428-018-2501-3. epub 2018 dec 4.
[5] 中国输血协会人类组织抗原专业委员会, 中华医学会血液学分会, 国家血液系统疾病临床医学研究中心 . 人类白细胞抗原基因分型技术平台规范化建设及临床应用专家共识[j]. 中华医学杂志,2023, 103(31): 2389-2411. doi: 10.3760/cma.j.cn112137-20230317-00422.
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